水貂肠炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：于永乐 张传美 杨海燕 杨瑞梅 张洪亮 单虎 YU Yongle;ZHANG Chuanmei;YANG Haiyan;YANG Ruimei;ZHANG Hongliang;SHAN Hu

作者机构：青岛农业大学山东省预防兽医学重点实验室青岛266109 

基　　金：科技基础性工作专项:畜禽重要疫病流行病学调查(2012FY111000) 公益性行业(农业)科研专项:宠物疫病快速诊断与疫苗研究与示范(201303042) 山东省农业重大应用技术创新项目:水貂犬瘟热 细小病毒防制技术研究 

出 版 物：《兽类学报》 (Acta Theriologica Sinica)

年 卷 期：2015年第35卷第1期

页      码：102-109页

摘      要：根据Gen Bank登录的水貂肠炎病毒(MEV)VP2蛋白基因的保守序列设计了1对特异性引物,经PCR扩增出146bp的目的片段,并克隆到pMD 18-T载体上,提取重组质粒经PCR及测序鉴定正确后,以10倍梯度稀释质粒作为阳性标准品,绘制荧光定量标准曲线,以此建立一种基于SYBR Green荧光染料的定量PCR特异性检测水貂肠炎病毒的方法。结果表明:该方法对MEV有很好的特异性,检测灵敏度为34拷贝/μL,且重复性试验变异系数均小于2%。临床检测中,在80份样品中检测到30份阳性样品,高于普通PCR和电镜观察方法的检出率。该方法的建立实现了对MEV临床早期快速诊断和定量分析,为毛皮动物MEV的防控提供了可靠的检测方法。

主 题 词：水貂肠炎病毒 SYBR GreenⅠ 荧光定量PCR 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0907[农学-草药学] 07[理学] 090705[090705] 0905[农学-林学类] 0906[农学-水产类] 09[农学] 0713[0713] 

核心收录：

D　O　I：10.16829/j.slxb.2015.01.013

馆 藏 号：203335724...