鸭痘病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：曹慧慧 孙文超 郑敏 韦显凯 苏姣秀 梁晟 郑列丰 李军 刘棋 

作者机构：广西大学动物科学技术学院南宁530001 广西动物疫病预防控制中心南宁530001 

基　　金：国家自然科学基金(31360601) 广西科学基金(2012GXNSFAA053073 2013GXNSFBB053006) 广西水产畜牧兽医局科技项目(GYMK1204936) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2015年第42卷第10期

页      码：2560-2566页

摘      要：为建立检测鸭痘病毒的TaqMan荧光定量PCR方法,本试验克隆了鸭痘病毒P4b基因,构建重组质粒pMD-DPV-P4b,并将其作为标准阳性模板。参照GenBank收录的禽痘病毒P4b基因设计合成1对特异性引物及与该引物相匹配的特异探针。以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-DPV-P4b为标准品,通过对反应条件进行优化,建立了一种检测鸭痘病毒的TaqMan荧光定量PCR方法。结果显示,该方法与禽流感病毒、鸭黄病毒、鸭肝炎病毒、新城疫病毒、鸭瘟病毒和小鹅瘟病毒等其他水禽病毒,以及山羊痘病毒和鸡痘病毒等其他痘病毒均无交叉反应,特异性好。该方法最低检测限为1.29×102拷贝/μL,比普通PCR检测方法高100倍。组内和组间变异系数均小于2%。结果表明,本试验所建立方法具有灵敏、特异、安全、快速的特点,适用于鸭痘病毒的检测。

主 题 词：鸭痘病毒 禽痘病毒 荧光定量PCR TaqMan探针 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2015.10.007

馆 藏 号：203335995...