牛γ干扰素基因的表达及其多克隆抗体的制备

作     者：宋佰芬 刘哲 曹宏伟 马金柱 徐闯 崔玉东 朱战波 黄玉兰 SONG Bai-fen;LIU Zhe;CAO Hong-wei;MA Jin-zhu;XU Chuang;CUI Yu-dong;ZHU Zhan-bo;HUANG Yu-lan

作者机构：黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院黑龙江大庆163319 

基　　金：黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院校硕士启动基金资助项目(S2005-34) 黑龙江省教育厅资助项目(11531262) 黑龙江省科技厅青年基金项目(QC2010051) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2011年第32卷第5期

页      码：36-40页

摘      要：为了获得牛γ干扰素表达产物及其多克隆抗体,利用分子生物学软件分析GenBank公布的牛γ干扰素的氨基酸序列,针对这一基因序列设计了一对特异性引物,并从牛脾脏淋巴细胞提取基因组总RNA,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增出IFN-γ基因,与pMD18-T载体连接后进行酶切、PCR扩增以及序列测定和分析,并将其连接到pQE-30原核表达载体中,命名为pQE30-IFN-γ,转化到大肠埃希菌x-LI Blue感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达,经纯化后免疫接种小鼠,用ELISA测定小鼠血清中抗体效价。结果表明,RT-PCR扩增到510 bp的片段,重组蛋白大小为22 ku,与预期大小相符。Western blot分析结果表明,重组蛋白能与His-tag的单克隆抗体反应,说明该蛋白具有良好的免疫活性。用ELISA测定小鼠血清的抗体效价均在1∶32 000以上,说明该蛋白免疫效果较好,为下一步研究干扰素的功能奠定了基础。

主 题 词：γ干扰素基因 克隆 表达 牛 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2011.05.009

馆 藏 号：203340331...