溶酶体组织蛋白酶L对人宫颈癌细胞HeLa迁移及侵袭能力的影响

作     者：郑海燕 阮健 潘玲兰 刘见桥 ZHENG Hai-yan;RUAN Jian;PAN Ling-lan;LIU Jian-qiao

作者机构：广州医科大学附属第三医院生殖医学中心广州510150 南方医科大学南方医院肿瘤中心广州510515 

基　　金：广东省自然科学基金博士启动项目(编号:S2013040013849) 广州市科技计划项目(民主科技重大专项)(编号:2012Y2-00022) 广州医科大学校基金博士启动项目(编号:2012C54) 南方医科大学中西医结合医院博士启动基金项目(编号:1201302009) 

出 版 物：《广东医学》 (Guangdong Medical Journal)

年 卷 期：2014年第35卷第22期

页      码：3460-3463页

摘      要：目的探讨溶酶体组织蛋白酶L(Cathepsin L)是否通过上皮-间充质转化(EMT)影响宫颈癌细胞的侵袭及迁移能力。方法利用荧光定量PCR来检测人宫颈癌细胞HeLa、CaS ki以及HeLa229中Cathepsin L的表达水平;设计并合成靶向Cathepsin L的特异性shRNA,通过脂质体转染法转染Cathepsin L表达最高的宫颈癌细胞HeLa以构建稳定低表达Cathepsin L细胞株,通过Western blot和定量PCR来验证shRNA的干扰效率,拟将Cathepsin L-shRNA和空白对照载体转染HeLa细胞,并将构建好的稳定细胞株命名为HeL a/shRNA,空白组和对照组分别为HeLa和HeLa/Con。通过Transwell法检测干扰后细胞的迁移及侵袭能力,Western blot法检测EMT相关指标E-cadherin和N-cadherin以及其上游信号分子Snail、WNT-5a的变化。结果 Cathepsin L-shRNA转染后,能够有效抑制HeLa细胞中Cathepsin L的表达;Transwell法检测结果显示,Cathepsin L干扰组细胞侵袭及迁移能力显著低于阴性对照组(P<0.001)。Western blot法检测结果发现,Cathepsin L干扰组细胞的E-cadherin表达增加,N-cadherin的表达降低;此外,Cathepsin L干扰组细胞的Snail、WNT-5a表达较对照组显著下降。结论运用RNA干扰技术能够有效沉默HeLa细胞的Cathepsin L基因,并诱导其迁移侵袭能力的下降,其可能的机制是通过调节EMT的上游信号分子Snail、WNT-5a的表达来调控EMT,从而影响宫颈癌细胞的迁移及侵袭。提示Cathepsin L在宫颈癌的发生发展中起重要作用,抑制Cathepsin L的表达可能成为一种治疗宫颈癌的新方法。

主 题 词：Capthesin L 上皮-间充质转化 宫颈癌 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.13820/j.cnki.gdyx.2014.22.005

馆 藏 号：203340457...