牛凝乳酶原基因的合成及其在乳酸克鲁维酵母中的表达

作     者：袁伟 柯涛 杜敏华 褚学英 胡凡 惠丰立 Wei Yuan;Tao Ke;Minhua Du;Xueying Chu;Fan Hu;Fengli Hui

作者机构：南阳师范学院生命科学与技术学院南阳473061 河南师范大学生命科学学院新乡453007 湖北大学生命科学学院武汉430062 

基　　金：河南省基础与前沿技术研究计划(No.102300410146) 河南省教育厅自然科学基金项目(No.2010A180017)资助~~ 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2010年第26卷第9期

页      码：1281-1286页

摘      要：凝乳酶在奶酪加工中应用广泛,为获得高活性的凝乳酶制剂,采用乳酸克鲁维酵母为宿主,首次对经密码子优化的牛凝乳酶原基因进行表达。利用DNAWorks3.0软件辅助设计,用两步PCR法合成了小牛凝乳酶原基因(GenBank Accession ***30448)。将该基因插入酵母表达载体pKLAC1,构建了重组载体pKLAC1-Prochy,并用电脉冲法将线性化的重组质粒转化到乳酸克鲁维酵母GG799中。通过含1%酪蛋白的YEPD平板活性筛选,PCR鉴定,最后获得了一株多拷贝整合的基因工程菌chy1。该菌株可分泌表达牛凝乳酶原,经SDS-PAGE分析,证明重组牛凝乳酶原的分子量约为41kDa,符合预期大小,酸化处理后为36kDa,证明可以正确自我剪切。液体培养96h后,酶活最高达到99.67SU/mL。分别以半乳糖和葡萄糖为碳源的条件下表达,其酶活性差异不大,说明在发酵期间,可以不经过半乳糖诱导即可产生高水平的牛凝乳酶原产物。该工程菌的获得为进一步优化产酶条件及放大工艺提供了条件,并为凝乳酶的工业化生产奠定了基础。

主 题 词：牛凝乳酶原 乳酸克鲁维酵母 基因合成 密码子优化 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1001[医学-基础医学] 082804[082804] 07[理学] 08[工学] 0828[工学-建筑类] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13345/j.cjb.2010.09.017

馆 藏 号：203341785...