嗜热厌氧乙醇杆菌调控因子P_(adhE)-1的分离、重组表达及其与adhE基因启动子的结合

作     者：裴建军 周庆 曲威 邵蔚蓝 PEI Jian-Jun;ZHOU Qing;QU Wei;SHAO Wei-Lan

作者机构：江南大学生物工程学院江苏无锡214122 南京师范大学生命科学学院江苏南京210046 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.30900008) 江苏省高校自然科学重点项目(No.09KJA180003) 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2010年第37卷第10期

页      码：1501-1505页

摘      要：嗜热厌氧乙醇杆菌发酵是生产纤维素乙醇的有效途径,而嗜热厌氧乙醇杆菌醛/醇脱氢酶(AdhE)是其乙醇代谢途径中的关键酶。以adhE启动子区域的DNA序列(TRRadhE)作为诱饵,通过制备核酸亲和层析柱,利用调控因子与DNA特异性结合的特点,得到调控因子PadhE-1。经过蛋白测序和NCBI数据库的比对,发现其N端序列与Thermoanaerobacter pseudethanolicus39E的LacI家族转录调控因子(GenBank accession ***_001665770)有90%的同源性。根据同源性设计引物,从嗜热厌氧乙醇杆菌JW200基因组中通过PCR扩增得到调控因子PadhE-1的基因,并克隆到表达载体pET-28a得到重组质粒pET-PadhE。转化大肠杆菌JM109(DE3),经IPTG诱导表达,Ni2+亲和柱纯化,得到重组表达的调控因子PadhE-1。体外凝胶阻滞实验证实PadhE-1能与TRRadhE特异性结合。这将有助于我们了解嗜热厌氧乙醇杆菌的乙醇代谢调控机理。

主 题 词：嗜热乙醇杆菌JW200 亲和层析 调控因子 凝胶阻滞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13344/j.microbiol.china.2010.10.001

馆 藏 号：203342140...