基于线粒体cyt b基因序列差异的组合PCR技术快速鉴定五种鳗鲡养殖种类的方法研究

作     者：赖晓健 林祥日 罗碧莲 江兴龙 LAI Xiao-Jianl,;LIN Xiang-Ri;LUO Bi-Lian;JIANG Xing-Long

作者机构：集美大学水产学院厦门361021 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心厦门361021 厦门海洋职业技术学院厦门361100 

基　　金：福建省科技厅高校产学合作项目 2016N5009号 福建省科技厅区域发展项目 2016N3002号 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心开放基金 RE201804号 

出 版 物：《海洋与湖沼》 (Oceanologia Et Limnologia Sinica)

年 卷 期：2018年第49卷第4期

页      码：925-931页

摘      要：在自然或人为因素下容易出现鳗苗种质混杂的现象,由于鳗鲡苗种在形态上十分相似,难以区分。为了保障鳗农的合法利益和提高养殖效益,急需建立一种能够在现场快速、高效使用的鳗鲡种质鉴定方法。本研究通过比对找出5种常见鳗鲡养殖种类:日本鳗鲡(Anguilla japonica)、美洲鳗鲡(***)、花鳗鲡(***)、太平洋双色鳗鲡(*** pacifica)、欧洲鳗鲡(***)线粒体细胞色素B(cytochrome b,cyt b)基因的差异序列,基于5个cyt b基因序列差异较大的片段,设计多对引物,分别经过PCR验证和条件优化,挑选出4对引物:aj S1/A1、r-a S1/A2、bp-m S5/A3和m-a S4/A4。将这4对引物组合在同一个反应体系中进行PCR扩增,进行条件优化,筛选出组合PCR的最优条件:退火温度为58oC;退火时间为45s;循环数为27。结果表明,通过扩增产物凝胶电泳中条带的有无及大小可快速准确的鉴定出五个鳗鲡种类。本研究建立的组合PCR方法在3小时内可完成整个种类鉴定过程,同时可使用便携式小型仪器完成操作,可满足现场快速、高效鉴定的要求。此外,通过MEGA5.0软件构建5种鳗鲡线粒体cyt b基因序列NJ进化树,发现花鳗鲡和太平洋双色鳗鲡先聚为一支,再与日本鳗鲡聚在一起,而欧洲鳗鲡和美洲鳗鲡聚在一起,进化树图显示的遗传距离和它们的地理分布的远近相似。

主 题 词：组合PCR 种质鉴定 鳗鲡 细胞色素B 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0908[0908] 07[理学] 0707[理学-海洋科学类] 0815[工学-矿业类] 0713[0713] 

核心收录：

D　O　I：10.11693/hyhz20180400097

馆 藏 号：203346724...