结核分枝杆菌PPE19的克隆及其GST融合蛋白的表达和鉴定

作     者：熊志红 朱琰 李仁德 庄玉辉 程小星 XIONG Zhi-hong;ZHU Yan;Li Ren-de;ZHUANG Yu-hui;CHEN Xiao-xing

作者机构：解放军第309医院结核病研究室北京100091 

基　　金：国家重大传染病专项基金资助项目(基金编号:2008ZX10003-012) 

出 版 物：《临床肺科杂志》 (Journal of Clinical Pulmonary Medicine)

年 卷 期：2012年第17卷第1期

页      码：77-79页

摘      要：目的构建结核分枝杆菌PPE19的GST融合蛋白表达载体,并鉴定其在大肠杆菌中的表达。方法以结核杆菌H37Rv基因组为模板,根据PPE19基因序列设计引物,运用PCR的方法获得PPE19基因,并将其克隆到pGEX-kg载体中,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性菌落进行质粒的酶切和序列分析;将构建正确的克隆进行诱导表达,对菌体裂解物进行SDS-PAGE分析;用western-blot鉴定融合蛋白的表达。结果正确构建了pGEX-PPE19原核表达载体,载体上基因序列正确;载体能在大肠杆菌中表达分子量约为70 kDa的重组蛋白;该蛋白能与GST抗体结合。结论成功构建了GST-PPE19融合蛋白的表达载体,为进一步进行PPE19蛋白的功能研究奠定了基础。

主 题 词：结核分枝杆菌 PPE19 GST融合蛋白 表达与鉴定 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1009-6663.2012.01.040

馆 藏 号：203349673...