应用siRNA干扰技术沉默铜绿假单胞菌外排泵基因mexB的蛋白表达

作     者：宋莹 邢铭友 许东 龚风云 夏超 王丽丽 谢旭华 申爱霞 占伟丽 宋建新 SONG Ying;XING Ming-you;XU Dong;GONG Feng-yun;XIA Chao;WANG Li-li;XIE Xu-hua;SHEN Ai-xia;ZHAN Wei-li;SONG Jian-xin

作者机构：武汉华中科技大学附属同济医院感染科430030 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(30873189) 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2011年第31卷第11期

页      码：961-966页

摘      要：目的 观察siRNA干扰质粒转入铜绿假单胞菌后,MexB蛋白表达量的变化.方法 针对mexB基因设计合成特异性siRNA分子,与pGPU6/GFP/Neo载体连接,构建pGPU6/GFP/NeosiRNA重组质粒.构建重组表达质粒pET22b＋/mexB,并转化大肠杆菌BL21（ DE3） plysS,诱导表达MexB蛋白,蛋白纯化后免疫家兔制备多克隆抗体.siRNA质粒分别电转化铜绿假单胞菌野生株、临床耐药株及mexB基因高表达株,运用Western blot观察转化8、12、24h后MexB蛋白表达量的变化.结果 成功构建pGPU6/GFP/Neo-siRNA重组质粒.成功表达铜绿假单胞菌外排泵蛋白MexB,并制备多克隆兔抗.siRNA质粒对铜绿假单胞菌野生株、临床耐药株及mexB基因高表达株的mexB基因均具有良好的沉默效果,而且沉默效果存在时间差异性.结论 siRNA质粒转化3株铜绿假单胞菌后,在8h及12 h时均可观察到MexB蛋白表达量明显减少,而在24 h时MexB蛋白表达量无改变.

主 题 词：siRNA mexB基因 Western blot 铜绿假单胞菌 

学科分类：100208[100208] 1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2011.11.001

馆 藏 号：203349678...