门静脉注射小鼠铁调素基因特异性RNA干扰腺病毒的方法研究

作     者：朱志鹏 曾从丽 方向明 ZHU Zhi-peng;ZENG Cong-li;FANG Xiang-ming

作者机构：浙江大学医学院附属第一医院麻醉科杭州310003 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2013年第30卷第5期

页      码：1035-1037页

摘      要：目的门静脉注射小鼠铁调素（Hepcidin）基因特异性小发夹RNA（shRNA）重组腺病毒干扰载体，观察其对肝脏HepcidinmRNA的干扰效果。方法根据Genebank小鼠Hepcidin基因序列及相关文献，设计shRNA并合成l对互补的DNA单链寡核苷酸，退火后克隆至线性化pENTR／u6入门载体，以CMV—EGFP改造载体，利用Invitrogen公司LR重组系统与pAd／BLOCK—IT—DEST进行重组，构建pAD—U6-shRNA—CMV—EGFP腺病毒载体，转染293A细胞进行包装、扩增，获得腺病毒。实验组用BALB／C小鼠麻醉后行病毒门静脉注射，常规饲养10d后取成活小鼠肝组织，Trizol法提取RNA，半定量逆转录聚合酶链反应（SqRT—PCR）法检测mRNA表达。另检测正常小鼠肝脏mRNA表达作对照。结果经测序鉴定证实pAD—U6-shRNA—CMV—EGFP腺病毒载体构建成功，获得病毒的滴度为：2．7×10^9ifu／ml。实验组Hepcidin基因相对表达量为1．30±0．53，明显低于对照组（6．39±1．00）。结论成功构建小鼠Hepcidin基因shRNA重组腺病毒干扰载体，其门静脉注射能够有效抑制目的基因表达。

主 题 词：铁调素 腺病毒载体 门静脉 基因治疗 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2013.05.055

馆 藏 号：203350254...