NogoB-shRNA表达质粒的构建及其在大鼠原代肝星状细胞收缩中的作用

作     者：文茂瑶 门若庭 但雪莲 吴文超 杨丽 WEN Mao-yao;MEN Ruo-ting;DAN Xue-lian;WU Wen-chao;YANG Li

作者机构：四川大学华西医院消化内科成都610041 四川大学华西医院再生医学研究中心心血管疾病研究室成都610041 

基　　金：四川省科技厅项目(No.2013FZ0085) 四川省成都市科技厅项目(No.13PPYB994SF-014)资助 

出 版 物：《四川大学学报（医学版）》 (Journal of Sichuan University(Medical Sciences))

年 卷 期：2014年第45卷第3期

页      码：362-366,350页

摘      要：目的构建针对大鼠NogoB基因的shRNA表达质粒,并初步探究其在大鼠肝星状细胞(HSCs)收缩功能中的作用。方法设计并合成针对大鼠NogoB基因3个不同位点的shRNA,通过DNA重组技术,将shRNA插入pSuper质粒中,构建NogoB-shRNA重组质粒,转染至大鼠原代肝星状细胞(HSCs)中,并通过Realtime PCR技术检测基因的相对表达量,筛选出能沉默大鼠NogoB基因的重组质粒,再通过Western blot加以验证,同时观察NogoB基因被抑制后,HSCs中内皮素1(Endothelin-1,ET-1)受体A、受体B(ETA、ETB)表达水平的变化。结果构建的3对重组质粒中,NogoB-shRNA2对NogoB的基因的表达具有明显的抑制作用。NogoB基因被抑制后,大鼠HSCs中ETA的表达无明显变化,ETB的表达升高,ETA/ETB的水平降低。结论成功构建了有效、特异的抑制大鼠NogoB基因表达的shRNA表达质粒,并初步观察到NogoB在肝星状细胞的收缩中可能有一定作用。

主 题 词：短发夹 RNA NogoB 肝星状细胞 

学科分类：1001[医学-基础医学] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13464/j.scuxbyxb.2014.03.002

馆 藏 号：203350677...