卷曲蛋白跨膜受体7基因启动子的构建及其肝癌特异性转录调控活性研究

作     者：许红攀 李智洋 龚来玲 夏艳艳 庞露 司进 Xu Hongpan;Li Zhiyang;Gong Lailing;Xia Yanyan;Pang Lu;Si Jin

作者机构：南京医科大学第二附属医院检验科210011 

基　　金：基金项目:国家自然科学基金(81472831) 江苏省科教兴卫工程项目(RC2011081) 江苏省“六大人才高峰”(2013-WSN-054) 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2016年第33卷第4期

页      码：965-968页

摘      要：目的构建卷曲蛋白跨膜受体7（FZD7）基因启动子，并分析其肝癌特异性转录调控活性。方法构建FZD7启动子及FZD7启动子变异体（MutFZD7），并设计合成荧光报告载体pFZD7-绿色荧光蛋白（GFP）、MutpFZD7-GFP。将各重组质粒载体转染至肝癌细胞HepG2、SMMC7721及正常肝细胞1．02中，用荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达。在裸鼠肝癌移植瘤模型瘤体内注射各重组质粒后，制备肿瘤组织冰冻切片并在荧光显微镜下观察GFP表达。结果转染pFZD7-GFP的肝癌细胞HepG2和SMMC7721中均有高强度荧光，且GFP表达率分别为（45．1±3．1）％和（25．3±2．5）％，显著高于L02细胞的GFP表达率[（0．4±0．3）％，P〈0．05]；而转染MutpFZD7-GFP的HepG2、SMMC7721和L02细胞中荧光强度明显较弱，且GFP表达率分别为（21．5±2．7）％、（12．3±2．1）％和（0．2±0．1）％，均显著低于转染pFZD7-GFP的各对应组（P〈0．05）；对照组中，转染对照质粒pFZD7-Luc的肝癌细胞及L02细胞中未检测到GFP的表达，而转染对照质粒pEGFP-N1的各细胞株中均有大量细胞表达GFP。在裸鼠肝癌移植瘤中有相似的结果。结论FZD7启动子具有高度的肝癌特异性活性，T细胞因子／淋巴增强因子（TCF／LEF）转录因子结合位点在其转录调控中发挥关键作用。

主 题 词：肝细胞癌 卷曲蛋白跨膜受体7 启动子 肿瘤特异性 转录调控 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071007[071007] 

D　O　I：10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2016.04.028

馆 藏 号：203351606...