维氏气单胞菌双基因PCR检测方法的建立

作     者：王惠 边宇 孟庆峰 杨滨僮 康元环 荆琦 单晓枫 钱爱东 WANG Hui;BIAN Yu;MENG Qingfeng;YANG Bintong;KANG Yuanhuan;JIN Qi;SHAN Xiaofeng;QIAN Aidong

作者机构：吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 吉林出入境检验检疫局吉林长春130062 吉林石油集团有限责任公司洮河农场吉林松原131100 

基　　金：国家自然科学基金项目(31201927) 国家质检总局科技计划项目(2013IK163) 

出 版 物：《动物医学进展》 (Progress In Veterinary Medicine)

年 卷 期：2013年第34卷第11期

页      码：16-19页

摘      要：为了建立维氏气单胞菌双基因PCR检测方法,以维氏气单胞菌ATCC35624基因组DNA为模板,选取16SrRNA和核酸酶基因为靶基因,设计2对特异性引物,建立维氏气单胞菌双基因PCR检测方法。验证方法的敏感性与特异性,同时应用该方法对模拟污染样本进行检测。检测结果显示应用PCR方法同时扩增出大小约880bp和320bp的DNA片段,通过序列比对分析,16SrRNA基因片段、exu基因片段序列与GenBank中登录的维氏气单胞菌ATCC35624株的的同源性均为99%,方法的敏感性较高,能检测到的DNA浓度达到了1.58×10-4 ng/μL,特异性较强,只有维氏气单胞菌标准株及分离株结果呈阳性;人工模拟污染试验显示,该方法的样本检出率达到了90%,高于细菌分离培养的检出率73.3%。建立的维氏气单胞菌双基因PCR检测方法可以克服传统生化鉴定的不足,为维氏气单胞菌的检测提供新的途径。

主 题 词：维氏气单胞菌 16SrRNA 核酸酶基因 聚合酶链反应 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1007-5038.2013.11.004

馆 藏 号：203355748...