扩增我国登革2型病毒全长cDNA分子的技术方法融合PCR方法

作     者：范宝昌 赵卫 胡志君 于曼 陈水平 杨佩英 秦鄂德 FAN Baochang;ZHAO Wei;HU ZhiJun;YU Man;Chen Shuiping;YANG PeiYing;QIN EDe

作者机构：军事医学科学院微生物学流行病学研究所北京100071 

基　　金：国家自然科学基金!资助项目 (3 0 0 0 0 14 4 ) 院科技创新启动基金资助 

出 版 物：《军事医学科学院院刊》 (Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences)

年 卷 期：2001年第25卷第2期

页      码：137-139页

摘      要：目的 :建立扩增登革 2型病毒基因组全长cDNA的融合PCR法 ,为深入探讨病毒基因组的结构与功能提供有效的技术途径。方法 :根据我国登革 2型病毒D2 4 3株序列设计引物 ,首先采用长链RT PCR技术扩增病毒基因组 5′及 3′半分子 ,然后以半分子采用融合PCR法将两个半分子构建成全长cDNA分子。为进一步证实所构建全长cDNA分子的特异性 ,再以融合PCR产物为模板扩增 5′非编码区序列 ,与pGEM T载体连接 ,在 377A型自动测序仪进行序列分析。结果 :通过对逆转录反应及PCR扩增条件的优化 ,建立了制备大片段cDNA及构建全长cDNA分子的融合PCR方法。扩增的我国登革 2型病毒的 5′及 3′半分子的长度均为 5kb左右 ,采用融合PCR方法制备的全长cDNA长约 11kb ,与预期大小一致 ,非编码区测序结果表明扩增产物为D2 4 3所特有。结论

主 题 词：登革热病毒 全长cDNA 长链逆转录PCR 融合PCR 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-9960.2001.02.016

馆 藏 号：203356477...