阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶基因真核表达载体的构建与鉴定

作     者：帖超男 王雅静 谢辉 毕世樑 刘佩娜 廖琳 

作者机构：四川大学华西基础医学与法医学院寄生虫学教研室四川成都610041 郑州市第五人民医院检验科 四川大学华西第二医院妇产科 

基　　金：国家自然科学基金(No.39970667) 

出 版 物：《预防医学情报杂志》 (Journal of Preventive Medicine Information)

年 卷 期：2008年第24卷第11期

页      码：862-865页

摘      要：目的构建阴道毛滴虫氢化酶体腺苷酸激酶(adenynate kinase,AK)基因真核表达载体并予以鉴定。方法根据AK基因已知序列设计合成一对引物,应用PCR技术从阴道毛滴虫基因组DNA中扩增出AK基因,并将其克隆入pMD18-T Simple载体。阳性克隆的重组质粒经酶切及PCR鉴定后,用双脱氧链末端终止法进行基因序列测定。应用BLAST软件辅助分析所测基因与Genbank中阴道毛滴虫氢化酶体AK序列的同源性。克隆载体PMD-18T-AK经限制性内切酶BamHI和XbaI双酶切,得到含这2个酶切位点之AK DNA片段,T4连接酶连接到含有这2个酶切位点的真核表达载体pcDNA3.1(+),构建出重组真核表达载体pcDNA3.1(+)-AK,经凝胶电泳鉴定、酶切鉴定、PCR鉴定证实DNA片段大小的正确性。结果经凝胶电泳鉴定、酶切鉴定、PCR鉴定证实含大小正确的AK DNA片段。结论成功地构建了基因真核表达载体。

主 题 词：阴道毛滴虫 氢化酶体 腺苷酸激酶 基因 克隆 序列分析 真核表达载体 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-4028.2008.11.008

馆 藏 号：203357913...