副溶血性弧菌Vop T蛋白的表达及其抗体的毒力菌株特异性研究

作     者：杨振泉 饶胜其 高璐 薛峰 李平 方维明 焦新安 YANG Zhen-quan;RAO Sheng-qi;GAO Lu;XUE Feng;LI Ping;FANG Wei-ming;JIAO Xin-an

作者机构：扬州大学食品科学与工程学院扬州225127 扬州大学江苏省人兽共患病重点实验室扬州225009 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心南京210001 

基　　金：江苏省科技支撑计划项目(No.BE2013733) 苏北科技发展计划项目(No.BC2013438)联合资助~~ 

出 版 物：《中国人兽共患病学报》 (Chinese Journal of Zoonoses)

年 卷 期：2015年第31卷第5期

页      码：441-446页

摘      要：目的研究副溶血性弧菌VopT蛋白的菌群特异性,为建立致病性副溶血性弧菌的快速检测方法以及探讨VopT的作用机制奠定基础。方法根据副溶血性弧菌VopT蛋白基因(VPA1327)序列设计合成引物,通过PCR从副溶血性弧菌致病株WX06152(血清型O3∶K6)中扩增出目的基因,构建原核表达载体pET-30a(+)-VPA1327并转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导表达,重组蛋白应用MALDI-TOF-MS/MS鉴定和His镍柱纯化,并通过免疫BALB/c小鼠制备抗血清,建立副溶血性弧菌VopT蛋白的间接ELISA检测方法,并分析其敏感性和毒力菌株特异性。结果成功表达了大小为33kDa融合蛋白,肽指纹图谱与副溶血性弧菌VopT蛋白一致。重组VopT抗血清能够特异性检测副溶血性弧菌毒力株的全菌细胞及其裂解蛋白,与环境株及其它种属菌株无明显交叉反应,灵敏度达到105 CFU·mL-1。结论重组VopT的抗血清具有良好特异性,为探讨VopT致病机理和分泌机制研究提供了一定的参考依据。

主 题 词：副溶血性弧菌 VopT蛋白 原核表达 多克隆抗体 特异性 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.05.011

馆 藏 号：203358369...