反向斑点杂交检测甲/乙型流感病毒及其基因分型的方法研究

作     者：杨子峰 李佩琼 关文达 王丹芬 秦笙 陈晓红 王玉涛 何蕴韶 

作者机构：广州医学院第一附属医院呼吸疾病国家重点实验室(广州医学院)广州510230 澳门科技大学中医药学院 广州医学院基础学院医学遗传学与细胞生物学教研室广州510182 中山大学达安基因股份有限公司广州510665 

基　　金：澳门特别行政区科学技术发展基金(No.018/2006/A) 广州市重大科技项目(No.2007Z1-E0111) 

出 版 物：《热带医学杂志》 (Journal of Tropical Medicine)

年 卷 期：2009年第9卷第10期

页      码：1095-1098页

摘      要：目的建立一种特异、灵敏的检测甲/乙型流感病毒并对其进行基因分型的反向斑点杂交方法。方法应用生物软件针对甲/乙型流感病毒的膜蛋白(Matrix Protein)基因和血凝素(Hemagglutinin,HA)基因的保守区域设计引物及探针,通过优化PCR和杂交的反应条件,建立检测甲/乙型流感病毒并对其进行基因分型的反向斑点杂交方法,验证方法的特异性和敏感性,并与直接免疫荧光法分别对相同的临床咽拭子标本进行检测,比较两者的检测结果,以评价该方法的临床应用价值。结果该方法对甲/乙型流感病毒的检测具有特异性,对呼吸道合胞病毒、柯萨奇病毒A型、副流感病毒3型、鼻病毒和腺病毒3型均无交叉反应,检测灵敏度为102～103copies/μL。在111例发热门诊病人的咽试子标本中,免疫荧光检测出3例甲型流感病毒、0例乙型流感病毒,阳性率为2.7%;反向斑点杂交检测出3例甲型流感病毒,其中1例H1、2例H3、0例H5、0例H9,4例乙型流感病毒,阳性率为6.3%。结论初步应用结果表明,本研究建立的检测甲/乙型流感病毒并对其进行基因分型的反向斑点杂交方法具有特异、灵敏的特点,为该方法的后续临床应用奠定基础。

主 题 词：流感病毒 反向斑点杂交 检测 基因分型 

学科分类：1004[医学-公共卫生预防医学类] 100401[100401] 10[医学] 

馆 藏 号：203364081...