牛传染性鼻气管炎病毒截短gB基因原核表达与间接ELISA诊断方法建立

作     者：李伟 孟日增 石建平 何江帅 赵晓 卢强 LI Wei;MENG Ri-zeng;SHI Jian-ping;HE Jiang-shuai;ZHAO Xiao;LU Qiang

作者机构：吉林大学人兽共患病研究所长春130062 黑龙江生物科技职业学院哈尔滨150025 吉林出入境检验检疫局长春130062 

基　　金：国家质检总局科技计划项目(2006IK009) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2010年第37卷第2期

页      码：83-86页

摘      要：用DNAstar-Protean分析牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白的亲水性、抗原性和表面展示概率,据IBRVgB全基因序列设计引物,PCR扩增编码385-550位氨基酸的基因序列。将目的片段克隆,酶切鉴定并测序鉴定后,定向连接到pET-28b载体上,转化表达菌DE3并诱导表达。经SDS-PAGE分析,获得大小约为21.4 ku的目的蛋白,与预测值相符。纯化后的蛋白浓度约为2.0 mg/mL,纯度为95.27%。间接ELISA及Western blotting证明,表达的目的蛋白具有抗原性。以该蛋白作为诊断抗原建立的间接ELISA诊断方法,确定的抗原包被量为50μg/mL,血清的最佳稀释倍数为50。与进口IBRV全毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性为92.3%、敏感性为93.8%、符合率为93.3%;试验结果表明该诊断方法具有良好的特异性和敏感性。

主 题 词：IBRV gB蛋白 原核表达 间接ELISA 

学科分类：090603[090603] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

馆 藏 号：203364180...