人细胞间黏附分子1基因慢病毒干扰载体感染MCF-7细胞下调靶基因表达

作     者：邸大琳 陈蕾 王丽娜 王成东 鞠吉雨 DI Dalin;CHEN Lei;WANG Lina;WANG Chengdong;JU Jiyu

作者机构：潍坊医学院免疫学教研室山东潍坊261053 潍坊医学院附属医院血液科山东潍坊261031 潍坊市人民医院产前诊断实验室山东潍坊261041 

基　　金：国家自然科学基金(81373185) 山东省自然科学基金(ZR2009CM019) 潍坊市卫生局科研计划项目(2012065) 山东省教育厅项目(J10LF62) 山东省卫生厅项目(2013WS0287) 

出 版 物：《细胞与分子免疫学杂志》 (Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology)

年 卷 期：2015年第31卷第8期

页      码：1048-1052页

摘      要：目的构建人细胞间黏附分子1(ICAM-1)慢病毒干扰载体,包装病毒后,感染人乳腺癌细胞MCF-7并检测干扰效果。方法针对人ICAM-1基因设计并合成3条靶向短发夹RNA(shRNA)干扰序列(ICAM-1 shRNA1、ICAM-1 shRNA2和ICAM-1 shRNA3)以及一个阴性对照序列(NS),将其克隆入载体p LKO.1-SP6-PGK-GFP中,测序正确后利用3个质粒病毒包装系统(干扰质粒载体-ps PAX2-p MD2.G)转染HEK293T细胞并包装慢病毒。收获病毒上清并测定病毒滴度。将所获病毒感染MCF-7细胞,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测干扰效率。结果菌落PCR结果显示目的片段成功插入p LKO.1-SP6-PGK-GFP载体中,DNA测序证实无误。将所制备之慢病毒感染MCF-7细胞,qRT-PCR和Western blot结果证实ICAM-1 shRNA3组ICAM-1 mRNA和蛋白水平有明显下降。结论成功构建了人ICAM-1基因shRNA慢病毒干扰载体,包装慢病毒后,感染MCF-7细胞可引起ICAM-1表达下调。

主 题 词：ICAM-1 慢病毒载体 乳腺癌 MCF-7细胞 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13423/j.cnki.cjcmi.007482

馆 藏 号：203366743...