siRNA介导BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响

作     者：卢燕军 付陆军 杨家进 曾鹏 蒋为民 吴建兵 Yan-Jun Lu;Lu-Jun Fu;Jia-Jin Yang;Peng Zeng;Wei-Min Jiang;Jian-Bing Wu

作者机构：南昌大学第二附属医院肿瘤科江西省南昌市330006 丰城市人民医院肿瘤科江西省丰城市331100 

基　　金：江西省科技支撑计划基金资助项目 No.20111BBG7001~~ 

出 版 物：《世界华人消化杂志》 (World Chinese Journal of Digestology)

年 卷 期：2016年第24卷第1期

页      码：10-18页

摘      要：目的:采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)的表达,观察BMP7基因沉默对人肝癌Hep G_2细胞增殖和迁移的影响.方法:设计并化学合成针对BMP7的3对小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),使用Trans LipidHL Transfection Reagent瞬时转染人肝癌Hep G_2细胞,并设正常对照组、Negative-si RNA组及BMP7-si RNA-1、BMP7-siRNA-2、BMP7-siRN A-3转染组.运用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)和Western blot法分别从m RNA和蛋白水平检测Hep G_2细胞中BMP7的表达变化,选取沉默效果最明显的si RNA片段进行后续实验.采用MTT比色法及Transwell迁移实验分别检测转染后细胞增殖及迁移的变化,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase3)表达情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期变化.结果:RT-PCR和Western blot结果显示,BMP7-s i R N A-3转染组B M P 7抑制效果最明显(P<0.01),选取BMP7-si RNA-3转染组进行后续实验.MTT比色法显示,转染后48,72 h细胞生长增殖均受到抑制(P<0.01).Transwell迁移实验显示,转染24 h后,BMP7-si RNA-3转染组Hep G_2细胞穿膜数均明显低于正常组和Negative-si RNA组(P<0.01).Western blot检测发现BMP7-si RNA-3组比对照组的细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达增加(P<0.01),Bcl-2表达差异无统计学意义.流式细胞仪检测发现转染后48 h,BMP7-si RNA-3组Hep G_2细胞被阻滞在G_2期(P<0.01).结论:si RNA介导BMP7基因沉默对人肝癌H e p G 2细胞的增殖与迁移具有抑制作用,对细胞凋亡有促进作用,并可阻滞细胞在G_2期.

主 题 词：小干扰RNA 骨形态发生蛋白7 肝癌 增殖和迁移 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.11569/wcjd.v24.i1.10

馆 藏 号：203366937...