副猪嗜血杆菌荧光定量PCR方法的建立及初步应用

作     者：崔沛 王东方 闫若潜 王淑娟 冉晓龙 班付国 Cui Pei;Wang Dongfang;Yan Ruoqian;Wang Shujuan;Ran Xiaolong;Ban Fuguo

作者机构：河南省动物疫病预防控制中心河南郑州450008 

基　　金：河南省科技创新人才计划项目(174200510003) 

出 版 物：《中国动物检疫》 (China Animal Health Inspection)

年 卷 期：2018年第35卷第9期

页      码：101-105页

摘      要：为建立一种快速、敏感、特异的副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR,FQ-PCR)检测方法,根据Gen Bank登录的HPS 16S rRNA基因序列,设计1对特异性引物和1条特异性Taq Man-MGB探针,建立了HPS荧光定量PCR检测方法,并对方法的敏感性、特异性以及重复性和稳定性进行了验证。结果显示:本研究建立的HPS FQ-PCR方法在10~1~10~6拷贝/μL模板范围内有很好的线性关系,所得相关系数为0.998;检测灵敏度可达10拷贝/μL,是常规PCR的10倍;特异性好,对pGEM-T/HPS重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对4个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/HPS重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好。对30份临床疑似HPS感染的组织样品进行应用检测,检出19份阳性,比商品化的HPS FQ-PCR检测试剂盒及常规PCR方法的阳性检出率高。结果表明,本研究建立的HPS FQ-PCR方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的优点,可用于临床HPS感染猪的早期检测,对HPS的快速诊断、综合防控具有重要意义。

主 题 词：副猪嗜血杆菌 荧光定量PCR 建立 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-944X.2018.09.025

馆 藏 号：203368398...