单核细胞增生李斯特氏菌实时荧光RPA检测方法的建立及应用

作     者：王金凤 刘立兵 耿云云 石蕊寒 孙晓霞 南汇珠 姜彦芬 王建昌 WANG Jin-feng;LIU Li-bing;GENG Yun-yun;SHI Rui-han;SUN Xiao-xia;NAN Hui-zhu;JIANG Yan-fen;WANG Jian-chang

作者机构：河北出入境检验检疫局检验检疫技术中心河北石家庄050000 河北省检验检疫科学技术研究院河北石家庄050051 河北师范大学生命科学学院河北石家庄050024 

基　　金：国家质量监督检验检疫总局科研项目(2016IK107) 河北师范大学博士基金项目(130401) 

出 版 物：《现代食品科技》 (Modern Food Science and Technology)

年 卷 期：2018年第34卷第8期

页      码：213-218,98页

摘      要：本研究旨在建立一种快速检测单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,LM)的实时荧光重组酶聚合酶扩增(real-time RPA)方法。基于LMhly A基因保守序列,设计合成特异性RPA引物和exo探针,所建立的LM real-time RPA方法能够在37℃等温条件下20 min内完成扩增。该方法仅对LM基因组DNA为阳性扩增,对其它20种致病菌基因组DNA的扩增均为阴性;以LM纯培养菌液的基因组DNA进行10倍列梯度稀释,并以之作为模板,其灵敏性可达到5×10-1 pg,与实验室已建立的real-time PCR方法一致。人工污染实验中,对于LM接菌量为3 CFU/25 g的羊肉和生菜样品,增菌14 h即可通过建立的real-time RPA方法检出,与传统培养方法和real-time PCR检测结果均一致,但是前者所需时间明显少于后者。本文建立的LM real-time RPA方法特异性强,灵敏性高,操作简单,反应迅速,并能够摆脱对价格昂贵的荧光PCR仪和专业实验室的需求,可应用于食品突发事件中LM的现场快速检测,对保障我国食品安全具有重要意义。

主 题 词：单核细胞增生李斯特氏菌 real-time RPA hlyA基因 食品安全 

学科分类：09[农学] 0903[农学-动物生产类] 

D　O　I：10.13982/j.mfst.1673-9078.2018.8.031

馆 藏 号：203368778...