鸡颗粒溶素的原核表达及生物活性分析

作     者：袁如意 马雪婷 殷昊 龚振兴 杨顺利 曲自刚 韩政岚 刘保红 刘晓丽 蔡建平 YUAN Ru-yi;MA Xue-ting;YIN Hao;GONG Zhen-xing;YANG Shun-li;QU Zi-gang;HAN Zheng-lan;LIU Bao-hong;LIU Xiao-li;CAI Jian-ping

作者机构：中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730070 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 

基　　金：中国农业科学院农业科技创新工程专项基金资助项目(2014-LVRI-09) 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2018年第38卷第9期

页      码：1725-1730,1734页

摘      要：为了克隆表达纯化鸡颗粒溶素（chicken granulysin,ChGNLY）并进行活力鉴定。本试验以基因组数据库预测的ChGNLY基因为模板设计引物,对提取的鸡脾脏总RNA进行RT-PCR,扩增得到的ChGNLY基因插入pMD-19T载体中并测序。将测序正确的GNLY基因克隆至pGEX-6p-1,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GNLY,并将其转化至感受态BL21,IPTG诱导表达融合蛋白,SDS-PAGE、Western-blotting和蛋白质谱鉴定融合蛋白的正确性。CellTiter-Glo2.0Assay检测融合蛋白的生物学活性。另外,对GNLY的分子特性进行了生物信息分析。结果显示,测序结果显示克隆的ChGNLY片段长237bp,编码79个氨基酸,所表达的融合蛋白相对分子质量约为36 000。重组ChGNLY融合蛋白能特异性与人颗粒溶素抗体发生反应。纯化后的GNLY融合蛋白经CellTiter-Glo2.0Assay检测,发现其具有剂量依赖性的细胞毒活性。系统发生分析显示GNLY可明显分为4个群。结构分析发现,ChGNLY活性区域表面带有大量正电荷,且位点保守。结果表明,本试验利用原核表达系统成功表达了具有生物学活性的ChGNLY,为ChGNLY后续功能的研究奠定理论基础。

主 题 词：颗粒溶素 原核表达 生物信息分析 生物学活性 

学科分类：090602[090602] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.09.i6

馆 藏 号：203369822...