靶向核仁素RNA干扰载体的构建与筛选

作     者：宋娟 张任飞 张彬 邓红兵 蒋碧梅 

作者机构：长治医学院病理生理学教研室046000 长治医学院附属和平医院 中南大学湘雅医学院 

基　　金：国家自然科学基金(30700290) 湖南省科技计划资助(2007JT3022) 

出 版 物：《长治医学院学报》 (Journal of Changzhi Medical College)

年 卷 期：2009年第23卷第3期

页      码：161-164页

摘      要：目的:设计靶向大鼠核仁素的RNAi序列,构建6个RNAi真核表达载体,采用转染工具细胞筛选有效靶点。方法:根据GenBank中的核仁素序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至pGCsi-lencerTMU6/Neo/GFP质粒中,通过测序鉴定后,将重组质粒用脂质体转染技术导入H9C2细胞,荧光显微镜检测GFP表达以判断转染效率,Western-blot检测靶细胞中核仁素蛋白水平的表达,筛选有效干扰序列。结果:经测序鉴定,克隆的RNAi打靶序列完全正确,无碱基突变。转染H9C2细胞36 h后,荧光显微镜下可检测到GFP标记的核仁素蛋白的表达,转染效率达75%以上。Western-blot结果显示3号核仁素干扰质粒(Ncl-3)能明显下调H9C2细胞的核仁素表达。结论:成功构建靶向核仁素RNA干扰载体,并筛选出效能最优序列,为进一步相关研究奠定基础。

主 题 词：RNA干扰 核仁素 质粒构建 基因转染 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1006-0588.2009.03.001

馆 藏 号：203371021...