幽门螺杆菌定植因子HpPrtC胶原蛋白酶的异源表达及其功能活性研究

作     者：赵慧琳 吴玉龙 荣倩玉 徐正 丁雲飞 张玉梅 乔媛媛 李波清 季晓飞 ZHAO Hui-lin;WU Yu-long;RONG Qian-yu;XU Zheng;DING Yun-fei;ZHANG Yu-mei;QIAO Yuan-yuan;L[1 Bo-qing];JI Xiao-fei

作者机构：滨州医学院病原生物学教研室山东烟台264003 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81672044) 国家自然科学基金青年基金项目(No.81702054 81501718) 山东省自然科学基金博士基金项目(No.ZR2017BC011) 烟台市科技计划项目(No.2016YT06000396) 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2018年第13卷第9期

页      码：958-962页

摘      要：目的异源表达幽门螺杆菌HpPrtC胶原蛋白酶,并检测其对胶原蛋白的降解活性。方法根据幽门螺杆菌基因组信息中编号hp0169基因的序列设计引物,PCR扩增HpPrtC基因的核苷酸序列,经NdeI和XhoI酶切后构建原核表达载体pET-22b(+)-HpPrtC,转化至*** BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用亲和层析法纯化重组蛋白,通过检测重组酶处理胶原蛋白后L-亮氨酸的产生量表征其胶原蛋白降解活性。结果 HpPrtC基因编码422个氨基酸,与已知PrtC家族蛋白酶氨基酸序列比对最高相似性<40%。克隆HpPrtC基因连接入表达质粒pET-22b(+),将测序正确的表达质粒pET-22b(+)-HpPrtC转化至感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导表达相对分子质量约为47×103的可溶性蛋白,与预期相符。经亲和层析纯化后的重组蛋白酶降解热变性I型胶原蛋白(可溶、不可溶)和天然I型胶原蛋白的活性分别为922.2±36.2、1168.8±65.6和674.0±13.4,与幽门螺杆菌培养液中胶原蛋白酶对可溶热变性I型胶原蛋白、不可溶热变性I型胶原蛋白和天然I型胶原蛋白活性分别为205.6±21.5、228.4±19.3和123.2±14.5一致。结论幽门螺杆菌定植因子HpPrtC为胶原蛋白酶。通过大肠埃希菌异源表达的重组HpPrtC蛋白具有胶原蛋白酶解活性,为探索该酶在幽门螺杆菌感染定植中的作用机制奠定了基础。

主 题 词：幽门螺杆菌 胶原蛋白酶 异源表达 胶原蛋白 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.180907

馆 藏 号：203373589...