地高辛标记Ucp2基因RNA探针的制备和应用

作     者：刘志贞 加三三 张凯丽 孙雨晴 赵虹 郝宇卉 牛勃 李美宁 LIU Zhi-zhen1, JIA San-san1,2, ZHANG Kai-li1, SUN Yu-qing1, ZHAO Hong1, HAO Yu-hui3, NIU Bo1,4, LI Mei-ning1

作者机构：山西医科大学生物化学与分子生物学教研室太原030001 第四军医大学口腔颌面外科国家重点实验室西安710032 忻州职业技术学院医学系忻州034000 首都儿科研究所生物技术室北京100020 

基　　金：国家自然科学基金(81741023) 山西省回国留学人员科研基金(2016-051)资助项目 

出 版 物：《中国生物工程杂志》 (China Biotechnology)

年 卷 期：2018年第38卷第9期

页      码：55-58页

摘      要：目的：制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法：提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果：成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论：成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。

主 题 词：Ucp2 RNA探针 全胚胎原位杂交 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13523/j.cb.20180908

馆 藏 号：203374161...