过表达MAT2A基因促进猪肌内脂肪细胞分化的研究

作     者：赵存真 吴海港 唐雪峰 焦凤超 马云 刘纪成 ZHAO Cunzhen;WU Haigang;TANG Xuefeng;JIAO Fengchao;MA Yun;LIU Jicheng

作者机构：信阳农林学院牧医工程学院河南省大别山区生态畜禽健康生产工程研究中心信阳464000 信阳师范学院生命科学学院信阳464000 

基　　金：国家自然科学基金(31702096) 河南省教育厅项目(18B230010) 信阳农林学院校级科技创新团队(CXTD-201701) 

出 版 物：《中国畜牧兽医》 (China Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第45卷第9期

页      码：2425-2432页

摘      要：本研究通过构建腺病毒介导的体外超表达载体,探究腺苷甲硫氨酸转移酶2A(methionine adenosyltransferase 2A,MAT2A)基因在猪肌内脂肪细胞分化中的作用。根据GenBank中猪MAT2A基因mRNA序列(登录号:NM_001167650.1)设计引物,提取猪脂肪组织细胞总RNA并反转录获得cDNA,以此为模板进行PCR扩增并连接到pAdTrack-CMV腺病毒穿梭载体中,对重组质粒pAd-MAT2A进行测序鉴定;pAd-MAT2A载体经PacⅠ限制酶酶切线性化,经质粒大片段回收纯化后转染293A细胞进行病毒包装;采用实时荧光定量PCR检测MAT2A基因表达情况,并提取蛋白进行Western blotting分析,取分化第8天的细胞进行油红O染色。结果表明,穿梭载体pAdTrack-CMV-MAT2A构建成功,并能与骨架载体pAdEasy-1实现同源重组;腺病毒载体pAd-MAT2A转染293A细胞后,病毒滴度达到1E+6PFU/mL,可满足侵染猪肌内脂肪细胞的需要。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,MAT2A基因mRNA和蛋白水平均显著上调。油红O染色结果显示,过表达MAT2A基因可促进猪肌内脂肪细胞内脂滴聚积。结果表明,腺病毒介导的MAT2A基因过表达在猪肌内脂肪细胞中呈上调趋势,MAT2A基因可促进脂质积累。

主 题 词：腺苷甲硫氨酸转移酶2A(MAT2A)基因 重组腺病毒 猪 肌内脂肪细胞 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.16431/j.cnki.1671-7236.2018.09.010

馆 藏 号：203374602...