多杀性巴氏杆菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

作     者：许腾林 邢桂玲 刘家森 刘大飞 李志杰 姜骞 康洪涛 田进 郭东春 曲连东 XU Teng-lin;XING Gui-ling;LIU Jia-sen;LIU Da-fei;LI Zhi-jie;JIANG Qian;KANG Hong-tao;TIAN Jin;GUO Dong-chun;QU Lian-dong

作者机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 东北农业大学动物科技学院黑龙江哈尔滨150069 

基　　金：国家重点研发计划(2016YFD0500800) 

出 版 物：《中国预防兽医学报》 (Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine)

年 卷 期：2018年第40卷第8期

页      码：706-710页

摘      要：为建立一种多杀性巴氏杆菌(Pm)快速敏感的检测方法,本实验根据Pm70株kmt1基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了该菌的TaqMan荧光定量PCR检测方法,并优化了检测反应条件。本实验建立的荧光定量PCR方法可以特异性检测Pm,而对鸭疫里默氏杆菌、支气管败血波氏杆菌等菌株检测结果均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。该方法对C48-1株标准品的检测灵敏度为1.75×10~1拷贝/μL,优于常规PCR检测方法(1.75×10~3拷贝/μL) 100倍;组内和组间重复性试验的变异系数均小于2%,具有良好的重复性。对20份疑似感染的临床病料样品(鸡肝脏、牛肺脏)进行增菌培养和分离鉴定,结果分离到8株多杀性巴氏杆菌;以建立的荧光定量PCR方法与常规PCR方法对增菌培养液进行检测,阳性率分别为40%(8/20)和25%(5/20),且荧光定量PCR方法与常规细菌分离鉴定的符合率为100%。对C48-1株感染致死的20份小鼠肝脏和脾脏组织研磨液进行检测,阳性率均为100%。本研究建立的方法能够快速、敏感的检测Pm,对于其临床和实验室的快速诊断具有重要意义。

主 题 词：多杀性巴氏杆菌 TaqMan探针 荧光定量PCR 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1008-0589.201709053

馆 藏 号：203377514...