抗p185单抗5E12Fab段基因的克隆及表达

作     者：张国民 陈宇萍 王琰 乔媛媛 安云庆 ZHANG Guo-Min;CHEN Yu-Ping;WANG Yan;QIAO Yuan-Yuan;AN Yun-Qing

作者机构：首都医科大学微生物学免疫学教研室北京100069 海军总医院中心实验科北京100037 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2005年第21卷第12期

页      码：889-893,898页

摘      要：目的克隆抗p185单抗5E12的Fab段基因并在原核细胞进行表达。方法用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR),以可变区第一骨架区的通用引物从分泌抗p185单抗的杂交瘤细胞系5E12中克隆Fd段和κ链的基因,重组到Fab表达载体中,在大肠杆菌中表达噬菌体抗体和可溶性Fab;根据前导肽序列设计引物,通过PCR介导的定点突变将V区基因氨基端序列恢复为5E12的原始序列;以NIH3T3/erbB-2细胞ELISA法、免疫组化法等进行特异性鉴定。结果以第一骨架区的通用引物从小鼠杂交瘤细胞5E12中克隆到Fd段和κ链的基因,在大肠杆菌中表达出Fab段抗体但无特异性抗原结合活性,分别将Fd段和κ链V区基因的氨基端序列矫正为亲本单抗的原始序列后,恢复了Fab段的抗原结合活性。单独恢复Fd段可变区氨基端序列可恢复抗原结合活性。但同时恢复κ链后活性却有所下降。结论成功构建了抗p185小分子抗体Fab并进行功能性表达,为进一步构建抗p185鼠单抗其他小分子抗体及其人源化改造打下基础;进一步证实抗体氨基端序列对抗体活性的重要性,为今后以PCR方法构建小分子抗体的工作提供了有益的借鉴。

主 题 词：抗p185单抗 Fab 可变区基因 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203378113...