短穗鱼尾葵花粉泛过敏原profilin基因的克隆表达、纯化及免疫学鉴定

作     者：刘晓宇 邬玉兰 刘志刚 孟光 张红云 LIU Xiao-yu;WU Yu-lan;LIU Zhi-gang;MENG Guang;ZHANG Hong-yun

作者机构：深圳大学过敏反应与免疫学研究所深圳518060 海南省海口市人民医院耳鼻咽喉科海口570208 

基　　金：国家自然科学基金(No.30070702) 广东省自然科学基金(No.020738) 广东省科技重点专项(No.2003A3080502) 深圳市科技计划项目(No.200326) 

出 版 物：《热带医学杂志》 (Journal of Tropical Medicine)

年 卷 期：2007年第7卷第7期

页      码：618-621,632页

摘      要：目的克隆并表达短穗鱼尾葵花粉中泛变应原肌动蛋白抑制蛋白(profilin)。方法利用RT-PCR结合RACE技术克隆短穗鱼尾葵花粉中泛变应原profilin的全长基因,并进行序列分析。然后设计带有酶切位点的特异性引物,采用RT-PCR获得整个短穗鱼尾葵花粉profilin的开放阅读框,将其与pET28a载体连接并转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,采用Western-blot检测其IgE结合活性。结果克隆获得了短穗鱼尾葵花粉profilin的全长基因,由608个碱基组成,开放阅读框为396个碱基(包括终止密码子),编码131个氨基酸。该序列编码的蛋白为小分子量酸性蛋白,等电点为4.52,相对分子质量约为14200。此序列已被GenBank收录,登陆号为EF173600。重组短穗鱼尾葵花粉profilin在大肠杆菌中高效的表达,进一步经Ni2+亲和层析柱纯化后经Western-blot检测具有良好的免疫学活性。结论成功地克隆和表达了短穗鱼尾葵花粉profilin,为短穗鱼尾葵花粉过敏的诊断和免疫治疗奠定了基础。

主 题 词：短穗鱼尾葵花粉 profilin 基因表达 纯化 

学科分类：100702[100702] 1007[医学-药学类] 1006[医学-中西医结合类] 100602[100602] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1672-3619.2007.07.002

馆 藏 号：203378571...