转录抑制因子Bmi-1基因正、反义真核表达载体的构建及鉴定

作     者：刘丹丹 孟秀香 刘奔 范颖 王莺燕 刘卫红 LIU Dan-dan;MENG Xiu-xiang;LIU Ben;FAN Ying;WANG Ying-yan;LIU Wei-hong

作者机构：大连医科大学诊断学实验中心辽宁大连116044 大连医科大学检验医学院辽宁大连116044 大连市中心医院检验科辽宁大连116033 

出 版 物：《大连医科大学学报》 (Journal of Dalian Medical University)

年 卷 期：2008年第30卷第2期

页      码：108-111页

摘      要：[目的]克隆转录抑制因子Bm i-1基因并构建其正、反义真核表达载体,为研究其功能及其作用机制奠定基础。[方法]根据Bm i-1基因已知序列,设计合成一对引物,上下游引物分别加入XhoI和C laI的酶切位点,用反转录PCR(RT-PCR)方法从人红白血病细胞株(K562)总RNA中扩增编码Bm i-1的基因片段(1017 bp),插入克隆载体pMD18-T,构建pMD18-Bm i-1载体,经限制性核酸内切酶谱证实后,再克隆至逆转录病毒载体pLNCX2中,构建pLNCX2-Bm i-1真核表达载体,并经测序证实。然后以pLNCX2-Bm i-1为模板,物扩增Bm i-1基因起始密码子及编码锌指结构区域上下171 bp长度的核苷酸片段,并反向连接于表达载体(pLNCX2)上。[结果]DNA测序表明编码序列与读框完全正确,RT-PCR扩增出和目的片段相同的片段,正义DNA片断长度为1029 bp,反义片断长度为171 bp,Bm i-1基因被成功扩增并被克隆至真核表达载体pMD18-T和pLNCX2中。[结论]Bm i-1正义及反义片断被成功扩增,并成功构建了Bm i-1正、反义重组真核表达载体,为进一步研究该基因打下了基础。

主 题 词：转录抑制因子 基因克隆 表达载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 10[医学] 

馆 藏 号：203378799...