实验设计法优化可溶性人肿瘤坏死因子αⅠ型受体包涵体的复性工艺

作     者：秦娇荣 蔡峰 赵兆 代云见 李春阳 QIN Jiao-rong;CAI Feng;ZHAO Zhao;DAI Yun-jian;LI Chun-yang

作者机构：成都生物制品研究所有限责任公司重组蛋白质药物及新疫苗研究室四川成都610023 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2018年第31卷第10期

页      码：1142-1149页

摘      要：目的通过实验设计(Design of Experiment,DoE)方法对重组的可溶性人肿瘤坏死因子αⅠ型受体(soluble tumor necrosis factorαreceptorⅠ,sTNFαRⅠ)包涵体复性工艺中的关键参数进行优化。方法采用DoE软件中的中心复合设计(Central Composite Design)建立二次模型(Quadratic Model),对复性工艺中游离巯基浓度(C_(-SH))和复性液蛋白浓度(C-Pro)2个关键参数进行优化。设置2个响应值:每克湿菌体中所获得的sTNFαRⅠ蛋白收率和每制备10 g sTNFαRⅠ蛋白所需复性体积(V-10 g),通过DoE软件对模型数据进行评估分析。在sTNFαRⅠ收率最高及V_(-10g)最小的前提下,采用二次模型响应面分析预测最优的复性参数值,并通过两次放大试验对优化结果进行验证。结果由2因素5水平2个Block共14组试验结果所建立的DoE响应面二次模型中心点重复性好,试验点均符合正态分布。响应面二次回归分析中,分别以sTNFαRⅠ收率和V_(-10g)作为响应值进行失拟检验的P均>0.05,模型失拟不显著。预测值和真实值接近,模型拟合度好。信噪比均>4,表明该模型有效,可用于复性工艺优化指导。通过以上模型得出:当C_(-Pro)为0.48 mg/m L,复性起始C_(-SH)为8.69 mmol/L时模型愿望值(0.643)最高,sTNFαRⅠ收率为16.38 mg/g,V_(-10g)为36.73 L。通过两次放大试验对优化结果进行验证,sTNFαRⅠ收率分别为11.34和9.72 mg/g,与优化前(收率均值5.1 mg/g)相比,有所提高。结论 DoE软件中心复合设计的二次模型可用于sTNFαRⅠ包涵体复性条件的筛选,且筛选结果为后续工艺放大提供了可靠的实验依据。

主 题 词：实验设计 包涵体 复性 可溶性人肿瘤坏死因子αⅠ型受体 中心复合设计 响应面 

学科分类：02[经济学] 07[理学] 070103[070103] 0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 0202[经济学-财政学类] 020208[020208] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 0703[理学-化学类] 0714[0714] 0836[0836] 0701[理学-数学类] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.002319

馆 藏 号：203379095...