猪流行性腹泻病毒CH/ZJ分离株S基因的克隆、原核表达和免疫原性分析

作     者：刘邓 冉多良 袁秀芳 徐丽华 牛登元 张存 王朝文 王一成 Liu Deng;RAN Duo-liang;YUAN Xiu-fang;XU Li-hua;NIU Deng-yuan;ZHANG Cun;WANG Chao-wen;WANG Yi-cheng

作者机构：新疆农业大学新疆乌鲁木齐830052 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所猪病研究室浙江杭州310021 甘肃农业大学甘肃兰州730070 

基　　金：浙江省科技计划重点项目(2007C22057) 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2010年第2期

页      码：19-22页

摘      要：为了获得具有免疫活性的猪流行性病毒S蛋白,试验参照GenBank中所收录的猪流行性腹泻病毒(PEDV)CV777株S基因序列设计1对特异性引物,去除信号肽,以PEDVCH/ZJ株为模板,通过RT-PCR扩增出目的基因,克隆入原核表达载体pET28a(+),转化到Top10感受态细胞中,测序并分析。结果表明:目的基因含有1个长966bp、编码322个氨基酸残基组成的多肽;与CV777株相比较,同源性为96.0%,但在398bp处缺失编码1个异亮氨酸的密码子,将重组质粒命名为pET-P-SP1;将pET-P-SP1转化到大肠杆菌***21-DL3(Rosetta)中,在IPTG诱导下表达;通过SDS-PAGE表达出与预期大小相符的约35.6ku的重组蛋白,重组蛋白以包涵体形式存在;表达产物占菌体蛋白的80%;表达蛋白能与抗猪流行性腹泻病毒高免血清反应,说明该重组蛋白具有免疫活性。

主 题 词：猪流行性腹泻病毒 S基因 原核表达 免疫学活性 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1004-7034.2010.02.008

馆 藏 号：203379908...