PADI4-siRNA-MSN的构建及其在RA防治中的初步应用

作     者：陈赛阁 成宇 宗明 范列英 CHEN Sai-Ge;CHENG Yu;ZONG Ming;FAN Lie-Ying

作者机构：同济大学附属东方医院检验科上海200120 

基　　金：国家自然科学基金项目(grant nos.81671599) 浦东新区科技发展基金创新资金(PKJ2015-Y18) 上海市卫计委青年基金(No.20154Y0115) 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2018年第34卷第10期

页      码：1515-1520页

摘      要：目的:制备介孔二氧化硅纳米载体(MSN)并包载肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)小干扰RNA(PADI4-siRNA-MSN),阐明PADI4-siRNA-MSN对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响。方法:采用模板法合成MSN,包被阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)及荧光标记分子罗丹明B(Rh B),检测其表征,包括粒径、Zeta电势、荧光和形貌。设计并合成2对FAM标记的针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链(si-944、si-1225)及阴性对照si-NC,制备PADI4-siRNA-MSN和siNC-MSN,转染RA-FLS,流式细胞术(FCM)鉴定转染率。采用荧光定量PCR、蛋白印迹技术检测转染48 h后,干扰组和阴性对照组细胞PADI4表达量,FCM检测细胞凋亡率,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察PADI4-siRNA-MSN胞内分布。所有数据采用配对t检验进行分析。结果:MSN经表征检测显示已成功制备并包被Rh B、PEI,FCM结果显示转染率为93. 3%(si-944)和91. 9%(si-1225)。si-NC组中的PADI4 mRNA水平为1. 23±0. 27; si-944、si-1225干扰组中分别为0. 35±0. 12、0. 44±0. 12,均显著低于阴性对照组(P<0. 05)。蛋白印迹结果与PCR结果一致。与si-NC组细胞凋亡率(8. 83±0. 15)相比,si-944和si-1225组细胞凋亡率(11. 72±0. 82,13. 00±1. 42)显著增加(P<0. 05)。CLSM结果显示PADI4-siRNA-MSN分布于核周。结论:PADI4-siRNA-MSN成功制备,并转染RA-FLS,有效沉默PADI4基因,显著增加RA-FLS的凋亡率。PADI4-siRNA-MSN在抑制RA-FLS增殖、促进凋亡中具有一定的应用前景。

主 题 词：类风湿关节炎成纤维滑膜细胞 介孔二氧化硅纳米载体 小分子干扰 细胞凋亡 肽酰基精氨酸脱亚胺酶4 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100201[100201] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-484X.2018.10.016

馆 藏 号：203380140...