Slug基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

作     者：钱江 傅仲学 文坤明 陈旺盛 

作者机构：重庆医科大学附属第一医院普通外科400016 

出 版 物：《免疫学杂志》 (Immunological Journal)

年 卷 期：2012年第28卷第2期

页      码：147-151页

摘      要：目的构建Slug基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体。方法针对人Slug基因的序列,设计出RNA干扰的靶序列,合成靶序列Oligo DNA,退火形成双链DNA,通过Age I和EcoR I酶切后的pGCSIL-GFP载体连接产生shRNA慢病毒载体,质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆并用插入鉴定引物进行PCR鉴定阳性克隆并测序,同时应用Real-time PCR和Western blot方法检测HCT116结肠癌细胞中Slug基因mRNA和蛋白的表达情况。结果 PCR鉴定与DNA测序证实合成的含Slug shRNA慢病毒载体寡核苷酸链插入正确。Western blot证实Slug RNAi慢病毒载体能够抑制Slug的表达。结论成功构建Slug基因RNAi慢病毒表达载体,为后续感染结肠癌细胞,为探索在结直肠癌发生和发展中的作用奠定基础。

主 题 词：RNA干扰 Slug 慢病毒载体 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 100214[100214] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.13431/j.cnki.immunol.j.20120033

馆 藏 号：203380523...