基于SYBR Green Ⅰ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7方法的建立

作     者：赵娟娟 徐华林 陶弋婧 郭萌萌 周涯 陈超 秦娜琳 郑静 田丹 徐林 

作者机构：遵义医学院免疫学教研室暨贵州省生物治疗人才基地贵州遵义563099 贵州省普通高等学校特色药物肿瘤防治特色重点实验室贵州遵义563099 遵义医学院医学物理学教研室贵州遵义563099 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(NO:31370918) 教育部"新世纪优秀人才计划"资助项目(NO:NCET-12-0661) 贵州省教育厅特色重点实验室建设项目(NO:黔教合KY字212) 

出 版 物：《遵义医学院学报》 (Journal of Zunyi Medical University)

年 卷 期：2015年第38卷第6期

页      码：636-641页

摘      要：目的本研究旨在利用常规荧光燃料SYBR GreenⅠ,通过茎-环法设计原理,建立有效检测微小RNA-7(miR-7)的Real-time PCR方法。方法利用miRBase数据库获得miR-7的成熟体序列,分别设计1条miR-7特异性反转录引物,以及Real-time PCR上游和下游引物;观察不同退火温度和不同引物浓度对扩增miR-7的Ct值影响,选择最优的退火温度和引物浓度;测定不同稀释度RNA下Real-time PCR扩增miR-7的效果;并利用该方法检测小鼠4个器官中miR-7的灵敏性和特异性。结果在基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR检测法中,miR-7扩增的最优退火温度为60℃,最优引物浓度为10μmol/L;在不同稀释度RNA下miR-7的Ct值线性关系较好,且在模板RNA低于100 pg的条件下,该方法仍可有效检测miR-7分子;最后有效检测出小鼠4个不同器官中miR-7的差异性表达。结论成功建立基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7的方法,可为后续研究miR-7的生物学功能提供了重要工作基础。

主 题 词：茎-环Real-time PCR法 SYBR GreenⅠ 微小RNA-7 表达 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

D　O　I：10.14169/j.cnki.zunyixuebao.2015.0152

馆 藏 号：203382334...