沙门菌PCR-ELISA检测方法的建立

作     者：韩来辉 董少晨 王佳凤 李井涛 HAN Lai-hui;DONG Shao-chen;WANG Jia-feng;LI Jing-tao

作者机构：吉林省食品检验所吉林长春130021 吉林省突发公共卫生事件处置服务中心吉林长春130021 长春生物制品研究所有限责任公司吉林长春130062 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2015年第28卷第5期

页      码：540-543页

摘      要：目的建立沙门菌PCR-ELISA检测方法,并进行验证。方法根据沙门菌inv A基因设计PCR-ELISA引物及探针,进行PCR扩增、核酸杂交及ELISA检测,对变性反应条件、杂交探针浓度、杂交时间和温度及显色时间进行优化,确定阴性、阳性判定的阈值,并进行敏感性、特异性及重复性验证。用建立的PCR-ELISA方法检测人工染菌的22批中药丸剂及27批液体乳中的沙门菌,并与PCR及GB4789方法进行比较。结果 150 mmol/L Na OH变性液可使核酸变性最彻底,50 pmol/ml地高辛标记探针为最适浓度,50℃60 min为最佳杂交时间和温度,最佳显色时间为50 min;阴性、阳性的阈值为0.265。该方法最低检测限为0.5 pg/μl,灵敏度高;能针对性地扩增沙门菌的特异性片段,检测特异性强;检测结果的批内、批间变异系数均小于10%,重复性较好。人工染菌的22批中药丸剂和27批液体乳的PCR-ELISA方法检测阳性率明显高于PCR法,与GB4789方法检测阳性率基本一致。结论优化后的PCRELISA方法特异性强,灵敏度高,重复性好,可快速检测食品、药品中的沙门菌。

主 题 词：沙门菌 聚合酶链反应 酶联免疫吸附试验 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1007[医学-药学类] 100705[100705] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100102[100102] 100103[100103] 0703[理学-化学类] 0836[0836] 10[医学] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.000917

馆 藏 号：203388160...