重组原核表达载体pGEX-4T-1-eIF5A的构建及表达

作     者：邱伟 李向云 王晓慧 徐祥 黄宏 徐云升 QIU Wei;LI Xiang-yun;WANG Xiao-hui;XU Xiang;HUANG Hong;XU Yun-sheng

作者机构：温州医学院附属第一医院皮肤科温州医学院皮肤性病研究所 中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室浙江温州325000 

基　　金：国家自然科学基金(30972800) 

出 版 物：《中国皮肤性病学杂志》 (The Chinese Journal of Dermatovenereology)

年 卷 期：2012年第26卷第11期

页      码：983-986页

摘      要：目的构建人eIF5A基因的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达pGEX-4T-1-eIF5A融合蛋白。方法以pCMV6-XL4-eIF5A作为模板,经PCR技术扩增目的片段,将获得的目的片段重组到原核表达载体pGEX-4T-1上,经酶切鉴定、DNA测序检测插入序列的正确性。将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A转化到***21内,经IPTG诱导后,GSTpull-down后SDS-PAGE电泳分析以及Western blot检测人eIF5A的表达。结果成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,GSTpull-down后电泳分析以及Westernblot结果说明大肠杆菌BL21诱导后表达出人eIF5A的glutathioneS-transferase(GST)融合蛋白。功能研究初步证明重组eIF5A在细胞增殖过程中发挥重要作用。结论构建成功的重组原核表达载体能在***21内表达eIF5A的GST融合蛋白,为进一步研究人eIF5A蛋白的结构和生理功能如促进创伤修复提供帮助。

主 题 词：真核起始因子5A 质粒 融合蛋白 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 1002[医学-临床医学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 100206[100206] 10[医学] 

馆 藏 号：203388918...