Gata4基因H435Y突变型小鼠模型的建立及验证

作     者：张慧 陈名武 方涛 张甜 倪文泉 ZHANG Hui;CHEN Mingwu;FANG Tao;ZHANG Tian;NI Wenqian

作者机构：安徽医科大学附属省立医院儿科安徽合肥230001 

基　　金：安徽省科学基金(1608085MH196) 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2018年第38卷第10期

页      码：1245-1249页

摘      要：目的选择野生型C57BL/6J小鼠为研究模型,利用CRISPR/Cas9技术建立Gata4基因H435Y突变型小鼠。方法针对Gata4基因的基因序列信息设计针对Gata4基因H435Y位点的单链向导RNA(single-guideRNA,sgRNA),经活性检测后,将具有活性的sgRNA和Cas9体外转录成RNA,通过显微注射将sgRNA、Cas9 mRNA以及含有点突变序列的donor DNA片段注射到小鼠受精卵中,通过PCR和基因测序方法对Gata4基因突变进行检测及鉴定,培育Gata4基因突变小鼠并分析后代的突变情况。结果顺利构建sgRNA载体并体外转录,成功sgRNA、Cas9 mRNA以及含有点突变序列的donor DNA片段注射到受精卵中。基因测序鉴定获得4只F0代初建鼠。选取阳性F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠杂交,得到F1代鼠,再相互交配获得F2代鼠。PCR显示F2代鼠Gata4基因H435Y突变,成功建立Gata4基因H435Y突变小鼠模型并传代繁育。结论通过CRISPR/Cas9技术可以成功建立Gata4基因H435Y突变小鼠动物模型。

主 题 词：Gata4 CRISPR/Cas9 sgRNA 动物模型 先天性心脏病 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 10[医学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1673-4254.2018.10.15

馆 藏 号：203388955...