重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体的构建及鉴定

作     者：刘伟 余英豪 LIU Wei;YU Ying-hao

作者机构：中国人民解放军南京军区福州总医院病理科福州350025 

基　　金：南京军区医学科学技术研究"十一五"计划课题(07Z034) 福建省自然科学基金(2010J01221)资助 

出 版 物：《中国比较医学杂志》 (Chinese Journal of Comparative Medicine)

年 卷 期：2012年第22卷第1期

页      码：54-61,86页

摘      要：目的构建重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定基础。方法设计引物扩增获得目的基因小鼠MIP-1α和B7-1基因的全长编码序列cDNA,将目的基因与经酶切线性化的慢病毒载体进行定向连接,其产物转化感受态细胞,对长出的阳性克隆进行PCR鉴定和直接测序序列分析。MIP-1α和B7-1目的基因质粒转染293T细胞,观察绿色荧光蛋白(GFP)表达,采用Western Blot法检测其蛋白表达,实时荧光定量PCR,检测慢病毒浓缩液的滴度。结果成功构建了重组表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的慢病毒载体,实时荧光定量PCR证实MIP-1α、B7-1基因重组慢病毒载体的滴度均达2.00E+8 TU/mL。结论本研究成功构建并包装出高滴度的小鼠MIP-1α和B7-1基因重组慢病毒载体,为淋巴瘤基因治疗的实验研究奠定了基础。

主 题 词：慢病毒载体 293T细胞 MIP-1α基因 B7-1基因 淋巴瘤 

学科分类：1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 100214[100214] 10[医学] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1671.7856.2012.001.013

馆 藏 号：203388981...