raldh2基因阻抑导致斑马鱼心脏发育畸形的机制

作     者：侯佳 桂永浩 王跃祥 宋后燕 HOU Jia;GUI Yong-hao;WANG Yue-xiang;SONG Hou-yan

作者机构：复旦大学附属儿科医院心血管中心上海201102 复旦大学分子医学教育部重点实验室上海200032 

基　　金：上海市科学技术委员会科研计划项目(054119512) 儿科医院院级基金项目(08QN-02) 

出 版 物：《中国实验动物学报》 (Acta Laboratorium Animalis Scientia Sinica)

年 卷 期：2011年第19卷第4期

页      码：331-335,I0021页

摘      要：目的通过显微注射吗啡啉修饰的反义寡核苷酸(MO)阻抑视黄醛脱氢酶2(raldh2)基因表达,探讨raldh2基因阻抑对斑马鱼胚胎心脏发育的影响及可能的分子机制。方法根据斑马鱼raldh2基因起始密码区域序列设计合成吗啡啉修饰的反义寡核苷酸,采用显微注射方法阻抑斑马鱼胚胎raldh2基因表达。构建raldh2-EG-FP重组质粒进一步验证MO的特异性和有效性。分析raldh2基因阻抑后对胚胎发育,尤其心脏表型和功能的影响。通过胚胎整体原位杂交,分析心脏相关nppa和tbx20基因表达模式以及raldh2阻抑后对其表达的影响。结果显微注射raldh2-MO能有效地特异地阻抑斑马鱼胚胎raldh2基因表达,raldh2-MO对胚胎发育影响呈剂量依赖性。raldh2基因阻抑可导致胚胎心脏发育畸形,干扰正常的房室分化和向右环化,导致房室瓣血液反流。与野生型胚胎比较,raldh2基因阻抑组胚胎心率和心室收缩分数降低(P<0.05),心功能受损。整体原位杂交结果显示raldh2基因阻抑后nppa基因表达改变,心室部位nppa表达清晰,而心房部位表达减弱。tbx20基因在心脏、运动神经元、顶盖及视网膜表达,raldh2基因阻抑后,tbx20表达下调,在心脏表达减弱,以心房和流出道部位更显著。结论 raldh2基因在心脏早期发育的多个环节发挥重要作用,影响房室分化、心管环化和心肌收缩等。在心脏发育过程中nppa和tbx20基因表达受到raldh2基因调控,可能参与RA信号缺乏导致心脏畸形的潜在分子机制。

主 题 词：视黄醛脱氢酶2 基因阻抑 斑马鱼 心脏发育 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 071002[071002] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1005-4847.2011.04.013

馆 藏 号：203389032...