蓝藻抗病毒蛋白-N在大肠杆菌中的表达及其抗体的制备

作     者：黄小花 章军 HUANG Xiao-Hua;ZHANG Jun

作者机构：厦门大学生命科学学院细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室厦门361005 

基　　金：国家自然科学基金项目资助(No30571422) 

出 版 物：《中国免疫学杂志》 (Chinese Journal of Immunology)

年 卷 期：2007年第23卷第12期

页      码：1117-1121页

摘      要：目的:构建抗病毒蓝藻蛋白-N(Cyanovirin-N,CV-N)表达载体并在大肠杆菌中稳定表达,并进一步制备用于检测转CV-N基因表达产物的特异抗体。方法:以已构建的pMD(CV-N)为模板,设计引物,利用PCR技术扩增出CV-N基因,将成熟CV-N的编码框序列构建到原核表达载体pET-His中,氨苄青霉素平板筛选及PCR、酶切鉴定,挑选出阳性克隆进行扩增,DNA测序正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE以及MALDI-TOF/MS分析鉴定,采用透析法重折叠复性,亲和层析分离纯化得到分子量为12700的带有组氨酸标签的重组CV-N融合蛋白。用亲和层析分离纯化后的CV-N融合蛋白作为抗原,采用皮下多点注射免疫的方法免疫昆明小鼠,经过31天的免疫,获得抗CV-N的多克隆抗体。结果:成功地获得了CV-N基因,并且以包涵体的形式表达于大肠杆菌中,表达量高达42.0%。用间接酶联免疫吸附(ELISA)方法,测得抗体效价超过1∶8000,Westernblot检测结果显示,该抗体能特异性地与CV-N抗原产生明显免疫亲和反应。结论:建立原核高效稳定表达CV-N系统,获得具有生物学活性的CV-N蛋白,所制备的抗体具有很好的灵敏性和特异性,为进一步研究其功能奠定基础。

主 题 词：抗病毒蓝藻蛋白-N 克隆表达 酶联免疫吸附反应 Western blot 

学科分类：1001[医学-基础医学] 100102[100102] 10[医学] 

核心收录：

馆 藏 号：203389171...