TaqMan荧光定量PCR检测猪流行性腹泻病毒方法的建立与初步应用

作     者：刘邓 袁秀芳 冉多良 徐丽华 牛登元 王朝文 王一成 LIU Deng;YUAN Xiu-fang;RAN Duo-liang;XU Li-hua;NIU Deng-yuan;WANG Chao-wen;WANG Yi-cheng

作者机构：新疆农业大学乌鲁木齐830052 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所杭州310021 甘肃农业大学兰州730070 

基　　金：浙江省科技计划重点项目(2007C22057) 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2010年第18卷第1期

页      码：28-34页

摘      要：根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒Ⅳ基因序列，设计了一对特异性引物和探针，扩增长度为186bp的片段。以克隆Ⅳ基因的质粒作为阳性标准品，建立了一种快速检测猪流行腹泻病毒含量的TaqMan荧光定量PCR方法。该方法在10^9-10^1copies／μL范围内具有良好的线性关系，可检测到初始模板中10copies／μL的质粒DNA，以猪圆环病毒、猪乙脑病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒和猪细小病毒为模板时，均检测不到荧光信号，而重复性实验中其变异系数均小于2％，表明此方法具有很好的特异性和重复性。应用此方法对采集的60份，陆床样品进行检测，其阳性检出率为92％，而用常规RT-PCR方法进行检测，阳性检出率仅为80％。表明荧光定量RT-PCR方法的敏感性明显高于常规PcR检测方法。

主 题 词：猪流行性腹泻病毒 荧光定量RT-PCR TaqMan荧光探针 

学科分类：090603[090603] 0710[理学-生物科学类] 071010[071010] 07[理学] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.3969/j.issn.1674-6422.2010.01.005

馆 藏 号：203389210...