抗病转基因大豆事件B4J8049外源T-DNA整合位点分析及特异性检测

作     者：包婉莹 仲晓芳 杜茜 赵倩倩 杨向东 BAO Wanying;ZHONG Xiaofang;DU Qian;ZHAO Qianqian;YANG Xiangdong

作者机构：吉林师范大学生命科学学院吉林四平136000 吉林省农业科学院农业生物技术研究所/吉林省农业生物技术重点实验室长春130033 

基　　金：国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2016ZX08004-004) 吉林省农业科学院创新工程项目(C6215000220 C7208000307) 

出 版 物：《东北农业科学》 (Journal of Northeast Agricultural Sciences)

年 卷 期：2018年第43卷第5期

页      码：21-26页

摘      要：大豆疫霉根腐病是由卵菌纲病原菌—疫霉菌(Phytophthora sojae)引起的大豆毁灭性病害之一。本研究前期利用农杆菌介导转化技术,将广谱抗病基因hrpZm导入栽培大豆Williams 82,获得高抗疫霉根腐病转基因大豆新品系B4J8049,并已进入环境释放试验阶段。为进一步推进该转化事件的生物安全评价及应用,本研究采用热不对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)方法分析外源T-DNA整合位点右边界序列,并依据其序列特征,建立该转化事件特异性检测方法。Southern杂交检测结果表明,转基因大豆事件B4J8049外源T-DNA插入拷贝数为1个。根据外源T-DNA插入片段序列设计3条嵌套特异性检测引物,与简并引物组合进行TAIL-PCR扩增反应,获得外源TDNA插入位点右边界序列。BLAST分析(https://***/)表明,外源T-DNA片段以单拷贝形式反向插入的方式整合到大豆基因组中第8号染色体的187 824位点。在此基础上,依据插入位点右边界序列设计检测引物,建立转基因大豆事件B4J8049特异性检测方法。本研究为该抗病转基因事件B4J8049及其衍生产品特异性检测提供依据。

主 题 词：hrpZm 转基因大豆 整合位点 侧翼序列 事件特异性检测 

学科分类：09[农学] 0901[农学-植物生产类] 

D　O　I：10.16423/j.cnki.1003-8701.2018.05.006

馆 藏 号：203390295...