基于CRISPR/Cas9技术AEG-1基因敲除神经细胞系的构建及AEG-1基因敲除介导的神经细胞周期阻滞和细胞凋亡抑制

作     者：王斌 刘昆梅 郭乐 张春 和祯泉 丁娜 杨华 孙之鹏 王晓 WANG Bin;LIU Kun-Mei;GUO Le;ZHANG Chun;HE Zhen-Quan;DING Na;YANG Hua;SUN Zhi-Peng;WANG Xiao

作者机构：宁夏医科大学宁夏颅脑疾病重点实验室省部共建国家重点实验室培养基地银川750004 宁夏医科大学临床医学院医学检验学系银川750004 

基　　金：宁夏高等学校科学技术研究项目(No.NGY201591) 国家自然科学基金项目(No.31660267) 宁夏自治区"十三五"重大科技项目(No.2016BZ07) 宁夏青年科技人才托举工程(No.TJGC2018033)资助 

出 版 物：《中国生物化学与分子生物学报》 (Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology)

年 卷 期：2018年第34卷第11期

页      码：1201-1210页

摘      要：星形胶质细胞上调基因-1(AEG-1)是近年来研究较多的癌基因,但在神经系统疾病方面研究尚少。AEG-1与神经退行性疾病有关,然而其具体作用机制尚不明确。本研究通过设计靶向AEG-1 sgRNA序列并合成相应寡核苷酸,将其克隆到GV392质粒中,构建sgRNA/Cas9二合一表达载体,并进行慢病毒包装纯化。用慢病毒感染小鼠海马神经元HT22细胞,进行药物筛选和sgRNA活性鉴定,建立稳定的AEG-1基因敲除的细胞系;并进一步观察神经元HT22细胞的增殖与凋亡能力。结果显示,成功构建了3种靶向AEG-1基因的sgRNA/Cas9二合一表达载体。所设计的sgRNA的插入序列和开放阅读框架完全正确,成功建立了AEG-1基因敲除的稳转神经细胞系。进一步研究表明,AEG-1敲除后的神经HT22细胞与正常神经HT22细胞相比,细胞突起数目减少,细胞周期阻滞,细胞凋亡率减少。以上结果为后续进一步研究AEG-1与神经系统疾病关系奠定了基础。

主 题 词：星形胶质细胞上调基因-1 CRISPR/Cas9 HT22细胞 细胞周期 细胞凋亡 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[071007] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

核心收录：

D　O　I：10.13865/j.cnki.cjbmb.2018.11.10

馆 藏 号：203394291...