羊口疮024基因的表达、多抗制备及亚细胞定位

作     者：苏莉 俞赵荣 杨侃侃 王元红 钟灵毓 崔佣楸 张高峰 张谦 王勇 李永东 SU Li;YU Zhaorong;YANG Kankan;WANG Yuanhong;ZHONG Lingyu;CUI Yongqiu;ZHANG Gaofeng;ZHANG Qian;WANG Yong;LI Yongdong

作者机构：安徽农业大学动物科技学院安徽合肥230036 宁波市疾病预防控制中心浙江宁波315010 

基　　金：国家自然科学基金(31602063) 安徽省自然科学基金(1508085QC60) 安徽农业大学大学生创新创业训练计划项目支持(XJDC2017060) 

出 版 物：《中国微生态学杂志》 (Chinese Journal of Microecology)

年 卷 期：2018年第30卷第10期

页      码：1117-1121页

摘      要：目的克隆表达羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)024基因,制备多克隆抗体,检测其免疫原性,并对其进行亚细胞定位分析。方法根据GenBank中羊口疮病毒024基因序列设计引物,进行PCR扩增。将其亚克隆至表达载体,构建原核重组质粒pGEX-6P-1-024以及真核重组质粒pEGFP-N1-024。将原核重组质粒转化Rosetta (DE3)细胞,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定024蛋白的表达情况。纯化后的024蛋白免疫BALB/c雌鼠,获得血清并制备多克隆抗体,进行Western-blot分析。将构建的真核质粒转染MDBK细胞,24h后通过免疫荧光观察其在细胞中的表达及亚细胞定位。结果 SDS-PAGE结果表明,羊口疮病毒024基因在Rosetta (DE3)细胞中正确表达,大小为59kDa。Western-blot结果表明024蛋白能与制备的多抗发生特异性反应,具有良好的反应原性。荧光显微镜下结果表明024蛋白转染MDBK细胞后主要在细胞质中表达。结论本实验为后续深入研究ORFV 024基因功能和致病机制奠定了基础。

主 题 词：羊口疮病毒 024基因 表达 多克隆抗体 亚细胞定位 

学科分类：090601[090601] 09[农学] 0906[农学-水产类] 

D　O　I：10.13381/j.cnki.cjm.201810001

馆 藏 号：203394451...