敲除SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因稳定HeLa细胞株的构建

作     者：孙瑜 陈红霞 齐永 李素芹 沈万鹏 饶继先 李佳萌 李晓玲 李越希 SUN Yu;CHEN Hong-xia;QI Yong;LI Su-qin;SHEN Wan-peng;RAO Ji-xian;LI Jia-meng;LI Xiao-ling;LI Yue-xi

作者机构：南京医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系江苏南京210029 南京军区军事医学研究所江苏南京210002 中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 

基　　金：江苏省自然青年基金项目(BK20160131 BK20160130) 国家自然青年基金项目(31701181 31600151) 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2018年第31卷第11期

页      码：1197-1200,1206页

摘      要：目的构建SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。方法分别设计并合成SOSSB1、SOSSB2和SOSSC亚基的两对靶向基因特定外显子的A、B两个单导向核酸(single guide RNA,sgRNA)及其互补链,与含BbsⅠ黏性末端的PX462载体连接,构建重组质粒。重组质粒经酶切和测序鉴定正确后,分别转染至HeLa细胞,用2μg/mL的嘌呤霉素培养筛选出稳定HeLa细胞。采用Western blot法对敲除效果进行鉴定。结果 A、B sgRNA均成功插入至PX462载体,重组质粒经酶切和测序鉴定,证明构建正确。Western blot结果表明,筛选出的SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除稳定HeLa细胞株分别不表达SOSSB1、SOSSB2、SOSSC蛋白。结论成功构建了SOSSB1、SOSSB2和SOSSC基因敲除的稳定HeLa细胞株。

主 题 词：SOSS基因 基因敲除 HeLa细胞株 CRISPR/Cas9n双切口酶 

学科分类：0710[理学-生物科学类] 0831[工学-公安技术类] 1002[医学-临床医学类] 1001[医学-基础医学] 07[理学] 071009[071009] 09[农学] 0703[理学-化学类] 0901[农学-植物生产类] 0836[0836] 090102[090102] 

D　O　I：10.13200/j.cnki.cjb.002138

馆 藏 号：203394486...