Cry2A毒素抗独特型单链抗体库的构建

作     者：刘媛 刘敏 张霄 徐重新 林曼曼 胡晓丹 仲建锋 谢雅晶 罗楚平 张存政 刘贤金 LIU Yuan;LIU Min;ZHANG Xiao;XU Chong-xin;LIN Man-man;HU Xiao-dan;ZHONG Jian-feng;XIE Ya-jing;LUO Chu-ping;ZHANG Cun-zheng;LIU Xian-jin

作者机构：江苏省食品质量安全重点实验室江苏南京210014 淮阴工学院生命科学与食品工程系江苏淮安223003 

基　　金：国家自然科学基金重点项目(31630061) 江苏省社会发展项目(BE2017706) 江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(17)3018] 中央财政农业推广项目[TG(16)-031] 江苏省自然科学基金项目(BK20181247) 

出 版 物：《江苏农业学报》 (Jiangsu Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2018年第34卷第5期

页      码：1174-1182页

摘      要：为了降低苏云金杆菌Cry2A毒素的免疫检测成本,开发廉价、无毒试剂盒,采用整体抗体免疫和噬菌体展示技术的路线,设计和构建了Cry2A抗独特型单链抗体库。以Protein A纯化的Cry2A兔多克隆抗体为免疫原,对雌性Balb/c系小鼠进行了免疫。在优化的包被原浓度下,用ELISA法测定小鼠血清效价及抗独特型抗体组分。选取效价最高的小鼠,取脾脏提取总RNA,RT-PCR法合成c DNA第一链。设计简并引物,利用PCR法扩增小鼠VH、Vκ基因,再用SOE-PCR法进行单链抗体基因的拼接。SOE-PCR产物和p IT2载体经双酶切后连接,电转入感受态***. TG1完成建库,并用多克隆噬菌体ELISA对抗体库与免疫原的结合能力进行了鉴定。结果表明,免疫鼠血清的效价在1∶1.6×105到1∶6.4×105倍之间。免疫鼠血清可对Cry2A与其兔多克隆抗体的结合最高可产生17. 6%的抑制,证明Ab2β和Ab2γ型抗独特型抗体的存在。最终构建了库容为1.2×107的Cry2A抗独特型单链抗体库,该抗体库与免疫原的结合信号/背景比值为6. 04。

主 题 词：Cry2A毒素 抗独特型抗体 单链抗体 噬菌体展示 

学科分类：082803[082803] 08[工学] 0828[工学-建筑类] 0804[工学-材料学] 

核心收录：

D　O　I：10.3969/j.issn.1000-4440.2018.05.029

馆 藏 号：203395092...