理性设计二硫键提高华根霉脂肪酶热稳定性

作     者：王睿 喻晓蔚 徐岩 WANG Rui;YU Xiao-Wei;XU Yan

作者机构：江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学药学院江苏无锡214122 宿迁市江南大学产业技术研究院江苏宿迁223814 

基　　金：国家自然科学基金(31671799) 江苏省"六大人才高峰"人才项目(NY-010)~~ 

出 版 物：《微生物学通报》 (Microbiology China)

年 卷 期：2018年第45卷第11期

页      码：2311-2319页

摘      要：【背景】华根霉脂肪酶的工业应用前景广泛,但是受到酶热稳定性较差的限制。【目的】对华根霉Rhizopus chinensis CCTCC M201021脂肪酶r27RCL分子结构进行理性设计,以提高该酶热稳定性。【方法】以Disulfide by design软件筛选r27RCL分子表面能够形成二硫键的突变位点,共得到7对二硫键突变。利用全质粒PCR进行定点突变,并在毕赤酵母中表达获得突变酶。【结果】最佳突变酶m9/10 (S85C-Q145C)与野生型酶r27RCL相比,60°C下的半衰期分别提高了4.5倍,T_m值提高了4.2°C,而催化活性保持不变。蛋白质晶体结构模拟显示,位于β2折叠上的85C和位于α4螺旋上的145C可形成二硫键,从而提高酶的热稳定性。【结论】酶分子中引入新增二硫键可以显著提升酶的热稳定性。

主 题 词：华根霉脂肪酶 热稳定性 二硫键 理性设计 

学科分类：08[工学] 082203[082203] 0822[工学-核工程类] 

核心收录：

D　O　I：10.13344/j.microbiol.china.180123

馆 藏 号：203395114...