pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达

作     者：肖婷 毛德华 李瑾 黄炳成 徐超 尹昆 王龙江 赵桂华 崔勇 朱嵩 刘功振 魏庆宽 孙慧 XIAO Ting;MAO De-hua;LI Jin;HUANG Bing-cheng;XU Chao;YIN Kun;WANG Long-jiang;ZHAO Gui-hua;CUI Yong;ZHU Song;LIU Gong-zhen;WEI Qing-kuan;SUN Hui

作者机构：山东省医学科学院山东省寄生虫病防治研究所山东济宁272033 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81501770) 山东省自然科学基金项目(No.2009ZRC03083 ZR2015YL051 ZR2016YL019 ZR2017YL003) 山东省医学科学院医药卫生科技创新工程 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2018年第13卷第10期

页      码：1109-1112,1120页

摘      要：目的构建pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2重组表达载体并进行293T细胞的转染表达。方法根据pcDNA3-HBsAg-p30-ROP2重组质粒设计引物,进行PCR扩增,获得HBsAg-p30-ROP2融合基因并进行酶切,酶切片段与pEGFP-N1载体连接,构建pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2真核表达载体,酶切和测序鉴定后转染293T细胞,采用荧光、Western blot和ELISA检测其蛋白表达效率;分别用P30单抗腹水、ROP2鼠源多抗、乙肝患者血清进行ELISA,检测融合蛋白的免疫反应性。结果 PCR扩增HBsAg-p30-ROP2基因片段约2 600bp,与理论值相符。构建的重组质粒pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2经双酶切获到约4 700bp和约2 600bp的两条片段,与预期相符。对重组载体测序,HBsAg基因的252位C→A,345位T→C,ROP2基因的695位A→T,且3个碱基突变均为同义突变。免疫荧光法检测pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2转染成功并正确表达,细胞蛋白浓度2.40mg/ml。提取的融合蛋白能被弓形虫p30单抗腹水、ROP2鼠源多抗和乙肝患者血清识别。结论成功构建pEGFP-N1-HBsAg-p30-ROP2重组表达载体,并在293T细胞中过表达,表达蛋白具有免疫反应性,为乙肝和弓形虫联合疫苗的研制奠定了基础。

主 题 词：pEGFP-N1 载体构建 HBsAg-p30-ROP2 蛋白表达 

学科分类：1007[医学-药学类] 100705[100705] 1001[医学-基础医学] 100103[100103] 10[医学] 

D　O　I：10.13350/j.cjpb.181011

馆 藏 号：203395183...